超敏ECL化学发光即用型底物 | 博士德生物 BOSTER Biological...

来自 : 发布时间：2024-05-03

产品货号：AR1170产品价格：128元/25mlX2应用范围：WB产品类型：WB辅助试剂发货周期：现货 选择规格: 128元/25mlX2 产品概况产品货号AR1170产品名称超敏ECL化学发光即用型底物价格规格128/50ml工作液（可用于500cm2的膜）溶液 A 25ml溶液 B 25ml保存条件4℃密封避光保存，一年有效产品说明博士德生产的超敏ECL化学发光试剂盒，是一款具有超高灵敏度的化学发光(ECL) 底物，可与二抗上耦连的辣根过氧化物酶发生化学反应，发出荧光，从而可以通过用X光片 压片或CCD成像仪检测样品, 当底物与优化的抗体浓度和封闭缓冲液配合使用时，可检测到 常规ECL底物无法检测的低丰度靶蛋白。产品特点1.用于辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物2.使用适当的一抗和二抗时，可在NC膜或PVDF膜上检测丰度为低皮克级的蛋白条带3.所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级4.通过胶片或成像系统进行曝光，易于捕获图像5.试剂盒组分能够在4℃条件下稳定放置一年6.配方经过优化，可适用于浓度极低的抗体检测注意事项1.A液和B液吸取过程中必须更换移液器枪头，避免相互污染失效。2.A液和B液混合为工作液后，需避免强氧化剂如次氯酸钠等对工作液的影响。3.须确保试剂瓶干净，无微生物或其它试剂污染。4.为了您的安全，请穿实验服并佩戴一次性手套。 Instructions 重要产品信息：好的免疫印迹结果需要优化实验条件，包括样品量，凝胶类型，转移方法，膜类型，封闭剂，洗涤缓冲液，一抗浓度，二抗浓度和孵育时间等。1.为获得最佳效果，在孵育步骤中使用摇床。2.不要使用叠氮化钠作为缓冲液的防腐剂，因为它会抑制HRP。3.始终戴上手套或使用干净的塑料镊子。金属装置必须没有可见的生锈痕迹，这可能导致斑点和/或高背景。4.工作液暴露在阳光下或任何其他强光下都可能损害工作液使用效果。5.由于阻断剂与抗体的交叉反应性引起非特异性信号，所以实验测试对于确定每种蛋白质印迹系统的适当封闭剂是至关重要的。阻止缓冲区也会影响系统的灵敏度。6.当使用抗生物素蛋白/生物素系统时，避免使用牛奶作为阻断剂，因为牛奶含有不同量的内源性生物素，导致高背景信号。7.使用足够量的洗涤缓冲液，封闭缓冲液，抗体溶液和底物工作溶液来覆盖印迹并确保其永不变干。使用大的封闭和洗涤缓冲液体积可以使非特异性信号最小化。8.将Tween-20洗涤剂（终浓度为0.05-0.1％）加入到封闭缓冲液和所有稀释的抗体溶液中，以减少非特异性信号。需要材料：NC膜或PVDF膜X射线胶片或成像系统摇床洗涤缓冲液：含有0.05-0.1％吐温20的洗涤液，PBS：10mM磷酸钠，150mM NaCl，pH7.2TBS：10mM Tris，150mM NaCl，pH7.4特异性的一抗，用洗涤缓冲液或封闭缓冲液稀释HRP标记的二抗，特异性针对一抗，用洗涤缓冲液或封闭缓冲液稀释封闭液：洗涤缓冲液中1-5％（w / v）封闭剂（例如酪蛋白，BSA或脱脂奶粉）注意：博士德的ECL底物与所有封闭缓冲液兼容使用说明：1.室温封闭膜60分钟，同时摇动。2.去除封闭液并添加一抗。在室温振荡培养1小时或在2-8℃过夜振荡。3.将膜悬浮于清洗缓冲液中摇动5分钟以上。更换清洗缓冲液至少4-6次。增加洗涤缓冲液体积，洗涤次数和洗涤持续时间可能有助于使背景信号最小化。4.在室温下孵育二抗1小时，同时摇动。5.重复步骤3，去除未结合的HRP结合物。注意：与HRP结合物孵育后，膜必须彻底清洗。6.通过混合等量的检测试剂A和B来制备底物工作溶液。每平方厘米膜使用0.1mL工作溶液。7.在室温下用工作液孵育印迹膜1-2分钟。8.将印迹膜放在透明的保鲜膜或保护膜中。使用吸收性的纸巾去除多余的液体，小心地将气泡压出。9.将印迹膜放在X光胶片或成像系统上显色。底物孵育后的30分钟内，发光最强烈。疑难解答：膜整个面都发光酶标二抗量过多减少二抗的浓度膜上有棕色或黄色带发光时间短低信号或无信号抗原或抗体量不足减少二抗的浓度转印失败优化转印二抗或底物活性低更换二抗或底物高背景二抗浓度过高降低二抗的用量封闭不够充分优化封闭封闭液使用不当更换质量更好的封闭液洗涤不够充分增加洗涤时间和次数抗原或抗体浓度过高降低抗原或抗体的用量抗体特异性差更换质量更好的抗体条带里有斑点无效的蛋白转移优化转印不均匀的膜更换质量更好的膜转印过程中膜胶之间有气泡小心的赶出气泡膜上有斑点封闭液不均匀过滤封闭液非特异性的条带HRP标记的二抗浓度过高降低二抗的用量SDS引起的蛋白非特异性结合不使用SDS抗体特异性差更换质量更好的抗体封闭不充分优化封闭 1993-2021 Boster Biological Technology co.Itd Tel:8008808748 E-mail:boster@boster.com.cn 鄂ICP备05005548号-1